Kits de ensayoEnsayos IMAP de enzimas
Ensayo homogéneo para quinasas, fosfatasas y fosfodiesterasas, aplicable sin importar la secuencia peptídica del sustrato.
La tecnología IMAP® ofrece un ensayo homogéneo aplicable a una amplia variedad de quinasas, fosfatasas y fosfodiesterasas, sin importar la secuencia peptídica del sustrato. El ensayo es un procedimiento simple de mezcla y lectura que permite determinar con precisión la actividad enzimática. Basado en la interacción específica de alta afinidad de grupos fosfato con nanopartículas (beads) que contienen metales trivalentes, IMAP es una plataforma genérica sin anticuerpos para evaluar la actividad de quinasas, fosfatasas y fosfodiesterasas. La reacción enzimática se realiza con sustrato marcado fluorescentemente. El agregado del IMAP Binding System detiene la reacción enzimática e inicia la unión de los beads a los sustratos fosforilados. La unión del sustrato a los beads, que correlaciona con la actividad enzimática, se detecta usando FP o TR-FRET como lectura. El IMAP Progressive Binding System permite optimizar las condiciones de FP y TR-FRET para cada sustrato. El sistema consiste en Progressive Binding Buffer A, Progressive Binding Buffer B y Progressive Binding Reagent. Los dos buffers y el reactivo se pueden combinar en distintas proporciones según el carácter ácido del sustrato elegido, las concentraciones deseadas de ATP y los parámetros de fondo. Molecular Devices ofrece una amplia gama de sustratos validados y calibradores. Los sustratos pueden usarse con las enzimas para las que fueron originalmente validados, o como sustratos potenciales para otras enzimas. • Los sustratos IMAP validados con condiciones de unión optimizadas garantizan el mejor rendimiento sobre la plataforma IMAP. • Los sustratos vienen en dos tamaños y pueden usarse tanto con IMAP FP como con IMAP TR-FRET. • Se han validado decenas de sustratos con más de 100 enzimas. Muchos sustratos están disponibles con marcador fluorescente rojo o verde, lo que permite multiplexar y mitigar problemas derivados de autofluorescencia de los compuestos. Datos de ejemplo de IMAP FP: curva de dilución de ROCKII. Ensayos genéricos de quinasas y fosfatasas con IMAP FP.
