Kits EarlyTox de ensayo de viabilidad celular

Los kits EarlyTox™ de ensayo de viabilidad celular son una familia de reactivos basados en fluorescencia para evaluar viabilidad celular, proliferación celular y diversos eventos de apoptosis usando células de mamíferos. Optimizados para lectores de microplacas, estos kits emplean un protocolo homogéneo sin lavado que permite caracterizar un perfil completo de respuesta a concentración de los compuestos a evaluar. Los ensayos de viabilidad celular son críticos en un amplio espectro de áreas de investigación, desde el estudio de los mecanismos de muerte celular hasta el desarrollo de nuevas terapéuticas dirigidas a la apoptosis. Una de las tecnologías de detección más populares para viabilidad celular es el lector de microplacas por fluorescencia. Los kits EarlyTox de ensayo de viabilidad celular fueron optimizados para una detección por microplaca altamente sensible y precisa, lo que provee una solución completa para monitorear viabilidad celular. Este kit permite la detección de las poblaciones de células de mamíferos vivas y muertas en base a la integridad de la membrana celular usando un lector de microplacas por fluorescencia. La calceína AM es un marcador de células vivas muy utilizado. La calceína AM no fluorescente atraviesa la membrana celular intacta y es convertida en calceína fluorescente por esterasas intracelulares. El número de células vivas queda indicado por la intensidad de la fluorescencia verde en el citosol, con excitación a 495 nm y emisión a 530 nm. La EthD-III es prácticamente no fluorescente e impermeable a una membrana plasmática intacta. Cuando la integridad de la membrana se ve comprometida (como ocurre en la muerte celular), la EthD-III entra a las células, se une a ácidos nucleicos y produce fluorescencia roja brillante en células muertas, con excitación a 530 nm y emisión a 645 nm. Este kit permite la detección de la población viva de células de mamíferos usando un lector de microplacas por fluorescencia en base a la integridad de la membrana y la actividad esterasa intracelular. La calceína AM es un marcador de células vivas muy utilizado. La calceína AM no fluorescente atraviesa la membrana intacta y es convertida a calceína fluorescente por esterasas intracelulares. El número de células vivas queda indicado por la intensidad de fluorescencia verde en el citosol, con excitación a 495 nm y emisión a 530 nm. La baja toxicidad celular de la calceína AM permite además el tracking celular a largo plazo y ensayos de proliferación. Este kit permite el análisis de apoptosis en base a la actividad de caspasa-3/7 y su secuencia diana consenso, Asp-Glu-Val-Asp (DEVD). Caspasa-3 y caspasa-7 son proteasas activadas durante la fase de ejecución de la apoptosis. El kit ofrece un ensayo homogéneo de un solo paso diseñado específicamente para lectores de microplacas. El sustrato fluorogénico (Ac-DEVD)2-R110 contiene dos secuencias DEVD y es completamente hidrolizado en el lisado celular por las enzimas. La hidrólisis de ambos péptidos DEVD libera el colorante verde fluorescente R110, generando un aumento sustancial de fluorescencia con excitación a 490 nm y emisión a 520 nm. El kit incluye el inhibidor competitivo de caspasa-3/7 Ac-DEVD-CHO como control negativo. También incluye R110 para generar una curva estándar que permite cuantificar la actividad de caspasa-3. Este kit permite la detección de apoptosis en poblaciones de células intactas mediante la medición de la actividad de caspasa-3/7 usando un lector de microplacas por fluorescencia o un sistema de imagen por fluorescencia. Caspasa-3 y caspasa-7 son proteasas activadas durante la fase de ejecución de la apoptosis. El sustrato NucView 488 de caspasa-3 (formulado en DMSO o en solución salina tamponada con fosfato (PBS), para el Kit EarlyTox Caspasa-3/7-D NucView 488 y el Kit EarlyTox Caspasa-3/7 NucView 488 respectivamente) se usa para detectar actividad caspasa-3/7 dentro de células intactas sin interferir con la actividad de la caspasa. El sustrato consiste en un colorante fluorogénico de ADN acoplado a la secuencia de reconocimiento DEVD de caspasa-3/7. Inicialmente no fluorescente, el sustrato atraviesa la membrana plasmática y entra al citoplasma. En células apoptóticas, la caspasa-3/7 escinde el sustrato, liberando un colorante de ADN de alta afinidad que migra al núcleo y tiñe el ADN con fluorescencia verde brillante (excitación a 500 nm, emisión a 530 nm). La tinción con NucView 488 es fijable con formaldehído y compatible con inmunotinción posterior. El kit incluye un reactivo opcional de enmascaramiento para reducir la fluorescencia de fondo cuando sea necesario. La formulación en PBS se recomienda para células sensibles al DMSO.