Análisis de apoptosis por imagen celular automatizada

La apoptosis es un proceso de muerte celular programada importante para procesos biológicos como el desarrollo embrionario y el mantenimiento normal de los tejidos. La disrupción de la regulación de la apoptosis está implicada en diversas enfermedades, incluyendo el cáncer. Eventos bioquímicos llevan a cambios característicos en la morfología celular como contracción celular, fragmentación nuclear, condensación de cromatina, degradación de ARNm y, finalmente, muerte celular. La apoptosis puede iniciarse vía la vía intrínseca o extrínseca, y ambas inducen muerte celular activando enzimas caspasas. Una forma de analizar la apoptosis es detectar caspasa-3 y caspasa-7, ambas activadas durante la fase de ejecución de la apoptosis. Por ejemplo, el Kit EarlyTox™ Caspasa-3/7 NucView 488 ofrece un sustrato capaz de detectar actividad caspasa-3/7 dentro de células intactas. El sustrato consiste en un colorante fluorogénico de ADN acoplado a la secuencia de reconocimiento DEVD de caspasa-3/7. Inicialmente no fluorescente, el sustrato atraviesa la membrana plasmática y entra al citoplasma. En células apoptóticas, la caspasa-3/7 escinde el sustrato, liberando un colorante de ADN de alta afinidad que migra al núcleo y se une al ADN. La excitación a 500 nm produce emisión de fluorescencia verde brillante a 530 nm y se puede usar para evaluar el nivel de activación de caspasa. Las células apoptóticas se pueden entonces visualizar y cuantificar por imagen automatizada. Células HeLa fueron tratadas con el compuesto staurosporina y teñidas con el Kit EarlyTox Caspasa-3/7 NucView 488 (verde). La máscara superpuesta (derecha) muestra células apoptóticas identificadas en verde y células no apoptóticas en rojo. El análisis de imágenes de células apoptóticas se puede realizar en el ImageXpress Pico Automated Cell Imaging System, que ofrece una plantilla de protocolo "Apoptosis" preconfigurada para facilitar la adquisición y el análisis. Outputs útiles como número y porcentaje de células apoptóticas y vivas se calculan automáticamente. Abajo hay un flujo típico para imagear y analizar placas de ensayo de apoptosis. Flujo típico para imagear y analizar células apoptóticas. En resumen, los beneficios de usar el ImageXpress Pico para ensayos de apoptosis incluyen: