Autof ms1000 MALDI-TOF

Autof ms1000A Revolución en microbiologíaDescripción Descripción general Base de datos Flujo de trabajo Especificaciones técnicas Recursos Preguntas frecuentes La identificación de microorganismososos al nivel de especie es el principal objetivo en microbiología. Durante muchos años, esta hazaña se ha logrado mediante laboriosos ensayos bioquímicos. Si bien los avances en las tecnologías de secuenciación de ácidos nucleicos han permitido tasas de detección altamente específicas de microorganismososos, estas tecnologías consumen demasiado tiempo y son costosas para ser comunes. Hardy Diagnostics se enorgullece de presentar el Autof ms1000* El Autof ms1000 proporciona una identificación automatizada, de alta velocidad y alta confianza y una clasificación taxonómica inducida por láser de bacterias, levaduras, hongos y hongos filamentosos basada en huellas dactilares proteómicas. Numerosos estudios han demostrado la mayor precisión, el tiempo de obtención de resultados más rápido y el menor costo que proporciona la tecnología MALDI-TOF en comparación con los métodos clásicos. 3,4,5 proporcionad de forma automática y gratuita Software robusto e intuitivo, compatible con 21 CFR parte 11 Operación rentable con todas las funciones de software incluidas en el precio de compra inicial Conectividad LIMS/LIS y compatible Calificación de instalación/calificación de operación/verificación de rendimiento soporta *Autof ms1000 es fabricado por Autobio Diagnostics Co. LTD. for Hardy Diagnostics*Solo para uso en investigación. No apto para uso en procedimientos de diagnóstico clínico. Descripción generalReferencias1. Olshina, MA y Sharon, M. (2016). Espectrometría de masas: una técnica de muchas caras. Revisiones trimestrales de biofísica, 49, e18. https://doi.org/10.1017/S00335835160001602. Singhal, N., Kumar, M., Kanaujia, PK y Virdi, JS (2015). Espectrometría de masas MALDI-TOF: una tecnología emergente para la identificación y diagnóstico microbiano. Frontiers in microbiología, 6, 791. https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.00791Principio de la espectrometría de masas MALDI-TOFM es una técnica analítica que ioniza (facilita la transición de fase de solución a gas) moléculas para que asuman cargas eléctricas transitorias. Se mide la relación entre la masa (m) y la carga (z) de la molécula (m/z) y se puede determinar el peso molecular1,2. La espectrometría de masas tenía una aplicación limitada a compuestos químicos, pero la llegada de la tecnología MALDI-TOF ha aumentado la amplitud de su idoneidad para hacer del análisis de macromoléculas, tales como proteínas, una posible hazaña2. La tecnología MALDI (Desorción/Ionización Láser Asistida por Matriz) es un método de “ionización suave” que minimiza el grado de fragmentación molecular y preserva la integridad de las muestras. Las aplicaciones en la investigación proteómica han allanado el camino para el cenit de MALDI-TOF: la identificación microbiana. Las muestras microbianas se preparan mezclando con una solución de matriz (ácido α-ciano-4-hidroxicinámico [CHCA]), un compuesto orgánico capaz de absorber luz ultravioleta (luz láser N2, λ = 337 nm) y convertir la luz ultravioleta en energía térmica, y se introducen en un entorno de alto vacío. Cuando la matriz y las muestras se agregan y se dejan secar, la mezcla cristaliza, atrapando las muestras en el mismo cristal laminar. La irradiación láser de la mezcla provoca rápidamente el calentamiento de la matriz, que pasa a un estado gaseoso junto con las proteínas microbianas. Los péptidos en estado gaseoso se convierten en iones, partículas cargadas eléctricamente, mediante transferencia de protones con la matriz2. Los iones protonados se aceleran a través de un campo eléctrico y se separan por una diferencia de potencial de voltaje (V0) en función de la relación masa-carga (m/z) de cada ion. La aceleración de los iones a través del tubo de vuelo se produce en un ambiente de alto vacío para garantizar que los iones obtengan vuelo libre al analizador de masas (detector). Luego los iones pueden detectarse por el MALDI-TOF ms para determinar sus respectivos pesos moleculares (Da). Base de datos El Autof ms1000 tiene la base de datos más amplia de la industria. Creada con más de 15.000 cepas, cada una con más de 5 espectros de referencia, con un promedio de más de 10 cepas por especie, la base de datos del Autof ms 1000 proporciona resultados altamente precisos. La base de datos local incluye un total de 1.003 géneros, 4.943 especies y 15.993 cepas.Gramo + Gramo -Levadura Hongos Filamentosos Micobacterias Género Especies Cepas Total 1,0034,94315,993 Como parte de la asociación, Hardy Diagnostics y Autobio Diagnostics Co. LTD. está aumentando constantemente la base de datos de Autof ms 1000. Constantemente se agregan nuevas cepas y especies, mejorando la confiabilidad y precisión del sistema. La base de datos de Autof ms 1000 contiene una multitud de cepas de referencia de: Diferentes regiones geográficas del mundo. Diferentes muestras. Diferentes tipos de medio de cultivo. Diferentes condiciones de crecimiento. Criterios que capturan la diversidad filogenética natural dentro de una especie. y aplicable a cualquier aislado, ya sean bacterias, levaduras o mohos. El tiempo práctico mínimo requerido para preparar cada aislado permite la preparación, adquisición y análisis de datos de un total de 96 muestras de células en placas objetivo en menos de 20 minutos. La función de identificación rápida única muestra el resultado de los ensayos en 0,1 segundos para una muestra simple. El tiempo promedio de identificación (adquisición y análisis de datos) para 96 ​​muestras es de 17,5 minutos. Función por lotes disponible para editar e identificar muestras en un formato totalmente personalizable. Acceso al sistema LIMS/LIS. Los informes se publican automáticamente. ¡No se requiere experiencia previa con espectrometría de masas! Software intuitivo, fácil de usar, proporciona una experiencia amigable para los usuarios. El Autof Acquirer ha sido diseñado para cumplir con los rigores y estándares de un entorno de trabajo no regulado. Autenticación gestión de usuarios Archivado de datos Registro de auditoría, incluyendo marcas de tiempo El Autof Acquirer automatiza todo el proceso desde la adquisición espectral hasta la generación de informes. Los informes incluyen un resumen de las ubicaciones de las muestras, los nombres, las descripciones y las puntuaciones de confianza. Los resultados se presentan en un esquema codificado por colores fácil de leer que facilita las interpretaciones. RangoDescripciónColor9.500 - 10.000Especies confiablesVerde9.000 - 9.499Resultado confiable de identificación de especiesVerde6.000 - 8.999Resultado confiable de identificación de géneroAmarillo0.000 - 5.999No hay resultado de identificación confiable. Los resultados de RedAutof ms 1000 se pueden exportar en un formato que un LIMS pueda leer fácilmente. Los datos se pueden descargar como EXCEL, TXT u otro formato de archivo para su posterior análisis. Los laboratorios que necesiten crear su propia base de datos local pueden hacerlo en una aplicación de software complementaria. Especificaciones técnicas DimensionesAlto: 1250 mmProfundidad: 705 mmAncho: 450 mmPeso: 101 kgLáserLáser de nitrógeno de 337 nm, enfoque fijo, 400 millones de disparos (esperanza de vida promedio de 10 años)Ancho de pulso: 2,5 nsFrecuencia: 1-60 Hz, ajustableAnalizador de masaTubo de vuelo lineal: 1050 mmRendimiento DatosRango de masa1 ~ 500 kDaResolución>3600 FWHM (Angiotensina)Sensibilidad50 fmol/uL (S/N de insulina ≥ 60)Precisión de masa<60 ppm (con calibración interna)Estabilidad de masa< 300 ppmRepetibilidad de masa CV <0,015%Rendimiento96 ensayos por portaobjetos con hasta 1000 ensayos por díaMuestra Target Slide Portaobjetos de acero inoxidable de 96 celdas con soporte magnético reutilizable Entrada y salida de muestra Mecanismo de introducción de muestras completamente automatizado La plataforma Target Slide es una etapa X-Y controlada por un actuador lineal paso a paso El actuador lineal paso a paso produce 5 μm con cada paso (repetibilidad de 10 μm) para un posicionamiento preciso del portaobjetos Fuente de iones Desorción/ionización láser asistida por matriz Fuente de iones sin limpieza Tecnología de extracción retardada: 0 ~ 1000 ns Fuente de iones variable voltaje: 0 ~ +20 kVDetectorGanancia multiplicadora típica 106 a 2800kVPancho de pulso para un evento de ion simple (FWHM): <2.35 nsSalida de corriente máxima para operaciones lineales: 10 mAVacuumLa bomba mecánica y la bomba turbomolecular establecen un vacío de 10-7 mbarResolución de masa1) proteína simpleAngiotensinógeno: m/z= 1760.01 (M+H)+, resolución de masa ≥3600Citocromo C: m/z= 12362,96 (M+H)+, resolución de masa ≥8002) Proteína mixtaInsulina: m/z= 5808,57 (M+H)+, resolución de masa ≥400Mioglobina M2+: m/z= 8477,14 (M+2H)2+, resolución de masa ≥600Citocromo C: m/z= 12362,96 (M+H)+, resolución de masa ≥700Sistema de visualización de muestrasLa cámara CCD monocromática proporciona alimentación de vídeo en tiempo real de la muestra. Alimentación en pantalla en las muestras Área de visualización de la interfaz del softwareFiltroFiltro de alta precisión de 0,01 μm: el 99,99% de los microorganismososos patógenos se filtran después del procesamiento Recursos Preguntas frecuentes ¿Cuáles son las limitaciones de MALDI-TOF? aplicaciones ms? Debido a la estrecha relación genética entre algunas especies microbianas y entre algunos grupos de complejos microbianos, cuando se utiliza la espectrometría de masas MALDI TOF, los resultados de identificación pueden ser propensos a errores1. En tales situaciones se requieren ensayos de confirmación adicionales. El Autof ms 1000 ha sido diseñado para alertar a los usuarios finales cuando se requieren medidas de confirmación adicionales. La siguiente tabla es una exposición de algunas especies/complejos propensos a errores cuando se utiliza la tecnología MALDI-TOF ms. Limitación de especies/complejosEscherichia coli/Shigella 2 La espectrometría de masas no puede distinguir Escherichia coli de Shigella de manera confiable. Shigella generalmente se clasifica como Escherichia coli.Burkholderia cepacia complex 3 La espectrometría de masas no puede identificar de manera confiable algunas especies en el complejo Burkholderia cepacia. la espectrometría solo puede identificar Salmonella al nivel del género. Complejo Enterobacter cloacae 7 La espectrometría de masas no puede identificar de manera confiable algunas especies en el complejo Enterobacter cloacae. Pseudomonas mallei/Burkholderia pseudomallei 8 La espectrometría de masas no puede distinguir de manera confiable Pseuadomonas mallei de Burkholderia pseudomallei. Streptococcus mitis/Streptococcus oralis 9 La espectrometría de masas no puede distinguir de manera confiable Streptococcus mitis de Streptococcus oralis.Acinetobacter baumannii complex 10 La espectrometría de masas no puede identificar de manera confiable algunas especies en el Acinetobacter baumannii complex.Aeromonas 11 La espectrometría de masas no puede identificar de manera confiable algunas especies en el género Aeromonas tales como Aeromonas caviae /Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii /Aeromonas sobria, etc.Listeria monocytogenes/Listeria innocuous 12La espectrometría de masas no puede distinguir de forma fiable Listeria monocytogenes de Listeria innocua. ¿MALDI-TOF ms puede detectar virus? El proceso de detección viral mediante espectrometría de masas MALDI-TOF es más complicado que el de bacterias y hongos13. Hay dos métodos principales: (1) Detección de proteínas, que consiste en identificar las proteínas características de los viriones en el espectro de masas directamente de un cultivo celular (actualmente no existe dicha base de datos para Autof ms 1000; los usuarios deben crearla ellos mismos); (2) Detección de moléculas de ácido nucleico: este método se basa principalmente en la combinación de PCR multiplex y espectrometría de masas. El principio es enriquecer primero el material de ácido nucleico viral mediante PCR, luego agregar cebadores específicos para el virus que se va a detectar y realizar una extensión de bases simples a través de cebadores específicos de secuencia para obtener fragmentos de productos, que pueden ser detectados por espectrometría de masas después de la desalación. El método puede usarse para la detección de virus respiratorios, virus de la influenza, enterovirus, virus del papiloma humano, etc., y tiene las ventajas de un alto rendimiento, bajo costo y alta sensibilidad14. ¿Cuál es el proceso para Control de calidad:del Autof ms1000? Nota: Calibre el Autof ms 1000 antes de realizar el Control de calidad:. Control de calidad:debe realizarse una vez por semana. Los resultados del Control de calidad:el informe debe ser impreso y archivado.Clasificación Nombre de la cepa/Material Número de cepa Resultado teóricoCalibraciónReactivo de calibración (Cat. No. MSA02) -Escherichia coliPositivo Control de calidad:Escherichia coli ATCC 25922 Escherichia coliPseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Pseudomonas aeruginosaStaphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus aureusCandida albicans ATCC 10231 Candida albicansControl negativo de calidad: Lisado 1 (Cat. No. MSA01) y Matriz CHCA (Cat. No. MSA03) -Pase de control negativo ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la tecnología MALDI TOF ms en comparación con otros métodos de detección microbiana? Método de detección microbiana VentajaDesventajaMALDI-TOF ms rápido Precisión comparable a NAAT15 Costo por ensayo significativamente menor en comparación con métodos moleculares e inmunológicos No requiere personal de laboratorio capacitado Mayor inversión inicial Limitaciones conocidas16 Requiere aislamiento de muestras17 Convencional; medio de cultivo y ensayos bioquímicos Sensible Económico Extenso y requiere mucho tiempo Los resultados pueden tardar más de 24 horas Requiere secuenciación de ADN microbiólogo capacitado El ADNr 16S y el ADNr 18S son estándares de oro Identificación meticulosa de microbios Requiere personal de laboratorio capacitado e instrumentación/software avanzado Caro Basado molecular rápido y preciso Detecta patógenos al mismo tiempo muestras que no requieren cultivo Necesita un ciclador térmico preciso Requiere capacitación personal de laboratorio Referencias1. Rychert, J. (2 de julio de 2019). Beneficios y limitaciones de la espectrometría de masas MALDI-TOF para la identificación de microorganismososos. Obtenido el 25 de marzo de 2021 de https://www.infectiologyjournal.com/articles/beneficios-and-limitations-of-malditof-mass-spectrometry-for-the-identification-of-microorganismososos.html2. Paauw, A., Jonker, D., Roeselers, G., Heng, J. M., Mars-Groenendijk, R. H., Trip, H., Molhoek, E. M., Jansen, H. J., van der Plas, J., de Jong, A. L., Majchrzykiewicz-Koehorst, J. A., & Speksnijder, A. G. (2015). discosososriminación rápida y confiable entre especies de Shigella y Escherichia coli usando espectrometría de masas MALDI-TOF. Revista internacional de microbiología médica: IJMM, 305(4-5), 446–452. https://doi.org/10.1016/j.ijmm.2015.04.0013. Wong, K., Dhaliwal, S., Bilawka, J., Srigley, J. A., Champagne, S., Romney, M. G., Tilley, P., Sadarangani, M., Zlosnik, J. y Chilvers, M. A. (2020). 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